免疫細(xì)胞存儲(chǔ)是將免疫細(xì)胞置于液氮低溫條件（-196℃）下存儲(chǔ)，使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài),，在需要的時(shí)候復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行應(yīng)用,。其原理是：在低溫條件下，降低細(xì)胞的酶活性,，即細(xì)胞代謝處于“暫停狀態(tài)”,，從而使細(xì)胞活性保存下來(lái)。
什么是免疫細(xì)胞,？
免疫細(xì)胞是指參與免疫反應(yīng)的白細(xì)胞群體,，涵蓋先天性淋巴細(xì)胞、吞噬細(xì)胞及能識(shí)別抗原,、產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)的淋巴細(xì)胞等,。
它們時(shí)刻與數(shù)以億計(jì)的微生物、變異細(xì)胞,、癌細(xì)胞等對(duì)抗,，顯著降低各類疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。
作為人體內(nèi)部的天然衛(wèi)士,，扮演著修復(fù)細(xì)胞故障,、維護(hù)整體健康的至關(guān)重要的角色。
免疫細(xì)胞如何凍存,？
免疫細(xì)胞儲(chǔ)存,，是通過(guò)采集自體外周血，于符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室中分離,、提取免疫細(xì)胞,，經(jīng)過(guò)體外增殖，形成數(shù)億級(jí)別的高活性細(xì)胞群,。
▲ 細(xì)胞凍存流程
隨后,，采用全自動(dòng)冷凍技術(shù)，將這些細(xì)胞置于-196℃液氮環(huán)境中長(zhǎng)期保存,，確保即使時(shí)隔20年,，細(xì)胞仍保有青春時(shí)期的活力,，當(dāng)需要時(shí)，可隨時(shí)提取使用,。
▲ -196℃數(shù)字化生物樣本管理存儲(chǔ)系統(tǒng)
免疫細(xì)胞可以凍存多久,？
科學(xué)研究表明，在極低溫度的冷凍環(huán)境中,，細(xì)胞能夠進(jìn)入一種類似休眠的狀態(tài),。在這種狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的酶活性被顯著降低,，從而避免了電離損傷的發(fā)生,，使得細(xì)胞能夠?qū)崿F(xiàn)長(zhǎng)期保存。例如,，在-70℃的冰箱中,，細(xì)胞可以安全地存放長(zhǎng)達(dá)一年之久。而當(dāng)細(xì)胞被保存在-196℃的液氮中時(shí),，它們的保存期限幾乎是無(wú)限的,。這種技術(shù)為細(xì)胞的長(zhǎng)期保存提供了一種有效的解決方案。
▲ 將免疫細(xì)胞移入液氮罐
為什么要凍存健康的免疫細(xì)胞
2021年《中國(guó)免疫學(xué)雜志》發(fā)表了一篇關(guān)于《冷凍保存對(duì)NK細(xì)胞活率及其腫瘤殺傷效果的影響》[1]的研究文章,。
▲ 參考文獻(xiàn)1
該研究經(jīng)過(guò)對(duì)比研究表明,，冷凍保存的NK細(xì)胞滿足臨床應(yīng)用所要求的活率和高效殺傷腫瘤細(xì)胞能力，可以發(fā)展成為即用型細(xì)胞藥物,，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景,。
活力：復(fù)蘇后活力不減
研究發(fā)現(xiàn)，即使冷凍三個(gè)月,，NK細(xì)胞復(fù)蘇后的活力仍可達(dá)到92%左右,，即使復(fù)蘇24小時(shí)后，活力仍可達(dá)到80%,。這意味著,，它們?nèi)跃邆淞己玫膽?zhàn)斗能力。
▲ 參考文獻(xiàn)1：凍存前后NK細(xì)胞活力對(duì)比
能力：關(guān)鍵能力仍保留
對(duì)于新鮮和冷凍的NK細(xì)胞的腫瘤殺傷效果,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣讓人欣喜,。
NK細(xì)胞能夠分泌一種叫做IFN-γ的物質(zhì)，有助于擊敗腫瘤,。冷凍后,，這一能力雖然有所下降，但差異并不顯著,。無(wú)論是在不同的靶點(diǎn)對(duì)比下，還是在不同的冷凍時(shí)間內(nèi),，它們對(duì)癌細(xì)胞的殺傷效果幾乎沒有差異,。
▲ 參考文獻(xiàn)1：新鮮及凍存NK細(xì)胞IFN-γ的分泌量
▲ 參考文獻(xiàn)1：新鮮NK細(xì)胞與凍存NK細(xì)胞表面活化性受體表達(dá)情況
▲ 參考文獻(xiàn)1：新鮮NK細(xì)胞與凍存NK細(xì)胞表面活化性受體表達(dá)情況
▲ 參考文獻(xiàn)1：96小時(shí)NK細(xì)胞對(duì)人肺癌細(xì)胞A549的殺腫瘤效果
不論是新鮮的還是“冷藏”后的,，NK細(xì)胞都是我們身體的勇敢戰(zhàn)士。以上研究證明,，即使經(jīng)過(guò)冷凍保存,，它們的戰(zhàn)斗力也幾乎沒有減弱。
凍存的免疫細(xì)胞與新鮮免疫細(xì)胞效果相同
2022年,，一篇發(fā)表《Front Oncol》雜志上的文獻(xiàn)[2]通過(guò)對(duì)比了從成人外周血分離的新鮮免疫細(xì)胞和分離后凍存過(guò)的免疫細(xì)胞在制備CAR-T后細(xì)胞的活性及臨床應(yīng)用后患者的臨床治療情況,。
▲ 參考文獻(xiàn)2
研究數(shù)據(jù)證明，冷凍保存的免疫細(xì)胞仍顯示出很高的抗腫瘤效力和特異性,，且能擴(kuò)增足夠的細(xì)胞數(shù)量用于臨床治療腫瘤并使患者完全緩解,，并且對(duì)比新鮮免疫細(xì)胞，效果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,。這再次印證了凍存后的免疫細(xì)胞可用于今后細(xì)胞臨床治療的可行性,。
免疫細(xì)胞治療技術(shù)
最常見的免疫細(xì)胞治療有：腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）療法、因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）療法,、自然殺傷細(xì)胞（NK）療法,、嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫（CAR-T）療法等。
01
TIL療法
是從患者腫瘤組織中分離出淋巴細(xì)胞,，在體外進(jìn)行大規(guī)模擴(kuò)增與培養(yǎng)后,，回輸至患者體內(nèi)，進(jìn)而特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞,，為免疫檢查點(diǎn)抑制劑失敗的實(shí)體瘤患者帶來(lái)了新的希望,。作為一種新型的抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞，主要作用于干預(yù)皮膚,、腎,、肺、頭頸部,、肝,、卵巢部位的原發(fā)或繼發(fā)腫瘤。
02
CIK療法
CIK細(xì)胞是人體免疫突擊兵,，全名cytokine-induced killer,。是人體外周靜脈血單個(gè)核細(xì)胞在體外培養(yǎng)獲得的一群異質(zhì)性細(xì)胞，主要用于手術(shù)和放化療后微小殘留病灶的清除,。
03
NK療法
自然殺傷細(xì)胞（NK）是人體內(nèi)重要的先天免疫細(xì)胞,，具有免疫清除和免疫監(jiān)視等功能，通常被認(rèn)為是抵抗病毒/細(xì)菌感染的第一道防線,，無(wú)需特異性抗原刺激,，即可殺傷靶細(xì)胞。
04
CAR-T療法
主要是將嵌合抗原受體的特異性與T細(xì)胞的免疫作用相結(jié)合,，再通過(guò)特異性識(shí)別,，殺傷腫瘤細(xì)胞,，近幾年通過(guò)優(yōu)化改良在臨床腫瘤治療上取得很好的效果，是一種非常有前景的,，能夠精準(zhǔn),、快速、高效,，且有可能治愈癌癥的新型腫瘤免疫治療方法,，在治療惡性血液腫瘤方面展現(xiàn)出了巨大潛力和應(yīng)用價(jià)值。
免疫細(xì)胞儲(chǔ)存技術(shù)
1.接收與預(yù)處理：觀察與檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)都符合后,，進(jìn)行一系列的預(yù)處理,，如：分離、提取等,。
2.低溫冷凍：免疫細(xì)胞一般在液氮中保存,，其溫度為-196°C。這樣的低溫可以確保細(xì)胞的生理和生化活性在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)得到保持,。
3.冷凍介質(zhì)：為保護(hù)細(xì)胞不受冰晶傷害,，通常使用含有防凍劑的特殊冷凍介質(zhì)，例如 DMSO (Dimethyl sulfoxide),。
4.緩慢冷凍：為避免細(xì)胞受到快速冷凍的傷害,，應(yīng)使用專門的冷凍設(shè)備進(jìn)行控制速率的冷凍。
5.無(wú)菌條件：免疫細(xì)胞的采集,、處理和存儲(chǔ)都應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行,，以避免微生物污染。
6.樣本標(biāo)識(shí)：每個(gè)樣本都應(yīng)清晰地標(biāo)識(shí),，包括捐獻(xiàn)者信息,、采集日期、細(xì)胞類型和數(shù)量等,。
7.質(zhì)量控制：定期對(duì)存儲(chǔ)的細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量檢查,，包括細(xì)胞活性、純度和無(wú)菌性檢測(cè),。
8.安全存儲(chǔ)：確保液氮罐或冷凍存儲(chǔ)器具有穩(wěn)定的電源和溫度監(jiān)控系統(tǒng),，并定期進(jìn)行維護(hù)和檢查。應(yīng)有備用的電源和液氮供應(yīng),。
9.數(shù)據(jù)庫(kù)管理：建立和維護(hù)一個(gè)細(xì)胞樣本數(shù)據(jù)庫(kù),，記錄每個(gè)樣本的所有相關(guān)信息。
10. 運(yùn)輸和轉(zhuǎn)移：如果需要將細(xì)胞樣本運(yùn)輸?shù)狡渌胤?，?yīng)使用專門的運(yùn)輸容器,，并確保在整個(gè)運(yùn)輸過(guò)程中維持適當(dāng)?shù)臏囟取?/span>
11. 復(fù)蘇：在使用前，免疫細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)特定的復(fù)蘇程序,，以確保細(xì)胞的活性和功能,。
